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南方墨點法

指数 南方墨點法

Southern印迹法,南方吸漬分析(Southern blot),是由英國生物學家Sir Edwin Southern發明,並因此得名(Southern為南方之意),是一種普及的分子生物學實驗技術。目的是偵測經由膠體電泳分離的樣品中,含有特定序列的去氧核糖核酸片段。 通常,先利用膠體電泳分離去氧核糖核酸(DNA)樣本中各種不同大小的分子。不同大小的分子在膠體電泳之後,會分離而散佈在膠體上不同的位置。接著,這些DNA分子可以利用虹吸作用,轉染到一個薄膜上,經由DNA變性使它們的雙股分開。因為雙股DNA已經固定在薄膜上,所以變性後無法再形成雙股螺旋;然後將上述薄膜暴露在雜交探針(probe)裡,讓探針和DNA雜交(hybridize)。探針是被會產生放射線、或可以放出顏色或螢光的物質標記的單股DNA或核糖核酸(RNA)片段;最後是觀察結果。薄膜上可以偵測到放射性或者螢光訊號的位置,就是含有可以與探針核酸序列進行偶合的去氧核糖核酸樣本散佈的位置。 類似的技術也被用來偵測經由膠體電泳分離的樣品中,含有特定序列的RNA片段,當應用在RNA的偵測時,被稱為北方墨點法。.

12 关系: 北方墨點法凝膠電泳等電位聚焦DNA變性西方墨點法脱氧核糖核酸雜交探針蛋白質電泳TM杂交核糖核酸核酸热力学

北方墨點法

北方墨點法(Northern blot)是分子生物學、生物化學中常用的實驗方法,通過探測樣品中的RNA(或隔离的mRNA)来研究基因表达。Kevil, C. G., Walsh, L., Laroux, F. S., Kalogeris, T., Grisham, M. B., Alexander, J. S. (1997) An Improved, Rapid Northern Protocol.

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凝膠電泳

凝胶电泳(英语:Gel electrophoresis)或称胶体电泳,是一种用于大分子(如DNA、RNA、蛋白质)以及其碎片的分离、分析技术。该技术被科学工作者用于分离具有不同物理性质(大小、电荷、等电点)的分子。凝胶电泳通常用于分析用途,但也可以作为预处理技术,在进行质谱、聚合酶链式反应、克隆、DNA测序或者免疫印迹等检测之前,进行分子的纯化。 凝胶电泳在用于分离核酸分子时,带有负电荷的核酸分子在外加电场的作用下穿过凝胶组成的网格。由于较小的分子更容易通过网孔,较小的分子凝胶基质中穿行地更快,并且可以移动得更远。这与分子筛的现象类似。 在分离蛋白质分子时,蛋白质分子往往由于太大而不能穿过凝胶中的网孔,因此蛋白质的分离是依靠蛋白质分子上带的电荷来进行的。 除了分离核酸和蛋白质等分子,凝胶电泳还可以用于分离纳米微粒。 之所以选用凝胶而不是液体作为电泳的介质,有以下因素的考量:首先,外加电场可以引起液体的热对流,在胶体中这种对流会被抑制;其次,有的凝胶可以起到一种分子筛的作用;凝胶还可以延缓分子穿越的速度,并且能在电泳后保持分离结果,为后续的染色提供机会。.

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等電位聚焦

等电位聚焦(Isoelectric focusing)是一种根据分子携带的电荷不同来分离分子的技术。等电位聚集通常在凝胶中进行。 分子会被集中在一个具有pH梯度的介质中,通过介质的电流将产生带正电荷的氧化极和带负电荷的还原极。带电分子会向相反电荷的一极运动,直到到周围pH值与其等电点相同时带电分子才停止在凝胶中运动。介质中的pH值梯度通常用脂肪族两性离子产生,这些药品需要在样品加入之前加入。.

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DNA變性

#重定向 核酸热力学.

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西方墨點法

西方墨點法(Western blot)或稱「蛋白質轉漬法」、「免疫墨點法」(immunoblot)或「西式吸印雜交」,是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,也是HIV檢測的方法之一。 利用特定抗體能夠專一結合其抗原蛋白質的原理來對樣品進行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息,來分析檢測特定蛋白質的生物學檢測技術。 发明者一般认为是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克(George Stark)。在尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981年所著的《分析生物化学》(Analytical Biochemistry)中首次被称为“Western印迹法”。.

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脱氧核糖核酸

--氧核醣核酸(deoxyribonucleic acid,縮寫:DNA)又稱--氧核醣核酸,是一種生物大分子,可組成遺傳指令,引導生物發育與生命機能運作。主要功能是資訊儲存,可比喻為「藍圖」或「配方」。其中包含的指令,是建構細胞內其他的化合物,如蛋白質與核醣核酸所需。帶有蛋白質編碼的DNA片段稱為基因。其他的DNA序列,有些直接以本身構造發揮作用,有些則參與調控遺傳訊息的表現。 DNA是一種長鏈聚合物,組成單位稱為核苷酸,而糖類與磷酸藉由酯鍵相連,組成其長鏈骨架。每個糖單位都與四種鹼基裡的其中一種相接,這些鹼基沿著DNA長鏈所排列而成的序列,可組成遺傳密碼,是蛋白質氨基酸序列合成的依據。讀取密碼的過程稱為轉錄,是根據DNA序列複製出一段稱為RNA的核酸分子。多數RNA帶有合成蛋白質的訊息,另有一些本身就擁有特殊功能,例如核糖體RNA、小核RNA與小干擾RNA。 在細胞內,DNA能組織成染色體結構,整組染色體則統稱為基因組。染色體在細胞分裂之前會先行複製,此過程稱為DNA複製。對真核生物,如動物、植物及真菌而言,染色體是存放於細胞核內;對於原核生物而言,如細菌,則是存放在細胞質中的拟核裡。染色體上的染色質蛋白,如組織蛋白,能夠將DNA組織並壓縮,以幫助DNA與其他蛋白質進行交互作用,進而調節基因的轉錄。.

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雜交探針

交探針(Hybridization probe)是一小段單鏈DNA片段(十幾到幾百個鹼基),用於檢測與其互補的核酸序列。雙鏈DNA加熱變性成爲單鏈,隨後用放射性同位素(通常用32P)、螢光染料或者酶(如辣根過氧化物酶)標記成爲探針。32P通常被摻入組成DNA的四種核苷酸之一的磷酸基團中,而螢光染料和酶與核酸序列以共價鍵相連。 當將探針與樣品雜交時,探針和與其互補的核酸(DNA或RNA)序列通過氫鍵緊密相連,隨後,未被雜交的多餘探針被洗去。最後,根據探針的種類,可進行放射自顯影、螢光顯微鏡、酶聯放大等方法來判斷樣品中是否含有,或者何位置含有被測序列(即與探針互補的序列)。.

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蛋白質電泳

蛋白质电泳(Protein electrophoresis)是根据蛋白质带电量或分子量的大小把不同的蛋白质分开,起到分离纯化的效果。根据带电量分离的叫等电点电泳(二維電泳),根据分子量分的是用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳。后者的运用较广泛,与转膜技术,抗原抗体反应,和成像技术合起来就是分子生物学实验室常用的western-blotting。 category:電泳 category:分子生物学 category:蛋白质方法 category:實驗室技術 category:验血.

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TM

TM 可以是.

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杂交

杂交(英語:hybrid)是一个涉及有性繁殖过程,是指二倍体或多倍体染色体在减数分裂后,与另一组分裂后的同源染色体重新配对,形成新的染色体称为杂交种,一般可以含有以下含义::.

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核糖核酸

核糖核酸(Ribonucleic acid),簡稱RNA,是一類由核糖核苷酸通過3',5'-磷酸二酯鍵聚合而成的線性大分子。自然界中的RNA通常是單鏈的,且RNA中最基本的四種鹼基爲A(腺嘌呤)、U(尿嘧啶)、G(鳥嘌呤)、C(胞嘧啶)通過轉錄後修飾,RNA可能會帶上(Ψ)這樣的稀有鹼基,相對的,與RNA同爲核酸的DNA通常是雙鏈分子,且含有的含氮鹼基爲A(腺嘌呤)、T(胸腺嘧啶)、G(鳥嘌呤)、C(胞嘧啶)四種。 RNA有着多種多樣的功能,可在遺傳編碼、翻譯、調控、基因表達等過程中發揮作用。按RNA的功能,可將RNA分爲多種類型。比如,在細胞生物中,mRNA(信使RNA)爲遺傳信息的傳遞者,它能夠指導蛋白質的合成。因爲mRNA有編碼蛋白質的能力,它又被稱爲編碼RNA。而其他沒有編碼蛋白質能力的RNA則被稱爲非編碼RNA(ncRNA)。它們或通過催化生化反應,或通過調控或參與基因表達過程發揮相應的生物學功能。比如,tRNA(轉運RNA)在翻譯過程中起轉運RNA的作用,rRNA(核糖體RNA)於翻譯過程中起催化肽鏈形成的作用,(小RNA)起到調控基因表達的作用。此外,RNA病毒甚至以RNA作爲它們的遺傳物質。 RNA通常由DNA通過轉錄生成。RNA在細胞中廣泛分佈,真核生物的細胞核、細胞質、粒線體中都有RNA。.

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核酸热力学

核酸熱力學是指溫度影響雙鏈DNA(dsDNA)的核酸結構。DNA变性(DNA denaturation)又稱DNA融化(DNA melting)是DNA雙螺旋解開成為兩條單股長鏈的過程。在過程中,使兩股長鏈上的鹼基相連的氫鍵會斷裂。 DNA的變性可以是溫度升高而產生的作用,也可能是其他化學物質如尿素的誘導。使DNA解開的融化溫度(Tm)是依DNA鏈的長度,以及特定核苷酸序列的組成形式而定。.

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Southern blot

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