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双向电泳

指数 双向电泳

双向凝胶电泳(Two-dimensional gel electrophoresis)是一種等电聚焦电泳与SDS-PAGE相结合,分辨率更高的蛋白质电泳检测技术。双向电泳后的凝胶经染色蛋白呈现二维分布图,水平方向反映出蛋白在等電點上的差异,而垂直方向反映出它们在分子量上的差别。所以双向电泳可以将分子量相同而等电点不同的蛋白质以及等电点相同而分子量不同的蛋白质分开。双向电泳是快速成长的蛋白质组学技术中最流行最通用的蛋白质分离方法。目前2D-PAGE能够在同一块凝胶上同步检测和定量数千个蛋白质。.

6 关系: 十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳分子量等电点等電位聚焦电泳蛋白质

十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳

十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)是膠體電泳的一種,常用於生物化學、鑑識科學、遺傳學和分子生物學等領域的分析技術,此項技術的原理,是利用檢體中蛋白質分子量大小的不同,使其在電泳膠中分離。是最常用的蛋白質分析技術之一。.

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分子量

分子量,又称“相对分子质量”,指组成分子的所有原子的原子量的总和,分子量的符号为Mr。定义为物质分子或特定单元的平均质量与12C质量的1/12之比值。由于是相对值,所以为无量纲量,单位为1。.

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等电点

等电点是一个分子或者表面不带电荷时的pH值。 被称为两性离子的兩性分子同时含有带正电荷和负电荷的官能团。整个分子的总电荷则由其周围环境的pH值决定,根据pH值的不同整个分子可能带正电荷,也可能带负电荷。其原因是因为这样的分子在不同的pH值环境中可能会吸收或者丧失質子(H+)。在pH值等于等电点时这样的分子所带的正电荷和负电荷互相抵消,使得整个分子不带电。 表面也会自然地带电荷形成固定層。一般假如决定表面电荷的离子是H+/OH−的话那么表面浸入的液体的pH值也会决定表面的总电荷。在这里等电点也是表面总电荷为零时的pH值。 等电点会影响一定pH值下的溶解度。两性分子在水或盐水中在其等电点的溶解度最低,一般会在等电点时从溶液裡沉淀出来。生物两性分子如蛋白质即含有酸性的,也含有碱性的官能团。组成蛋白质的氨基酸可能是带正电荷的、带负电荷的、中性的或者本身是两性的。它们的电荷加在一起是蛋白质的电荷。pH值小于等电点时蛋白质的总电荷是正的,大于等电点时是负的。因此使用等电聚焦的技术可以在聚丙烯酰胺凝胶裡根据蛋白质不同的等电点把它们分离开来。等电聚焦也是双向凝胶电泳的第一步。.

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等電位聚焦

等电位聚焦(Isoelectric focusing)是一种根据分子携带的电荷不同来分离分子的技术。等电位聚集通常在凝胶中进行。 分子会被集中在一个具有pH梯度的介质中,通过介质的电流将产生带正电荷的氧化极和带负电荷的还原极。带电分子会向相反电荷的一极运动,直到到周围pH值与其等电点相同时带电分子才停止在凝胶中运动。介质中的pH值梯度通常用脂肪族两性离子产生,这些药品需要在样品加入之前加入。.

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电泳

电泳是空间匀强电场作用下,分散粒子在流体中发生移动的现象。由于各物质的迁移速率有差别,故电泳是分离物质的常用方法。它又可分为:.

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蛋白质

蛋白质(protein,旧称“朊”)是大型生物分子,或高分子,它由一个或多个由氨基酸残基组成的长链条组成。氨基酸分子呈线性排列,相邻氨基酸残基的羧基和氨基通过肽键连接在一起。蛋白质的氨基酸序列是由对应基因所编码。除了遗传密码所编码的20种“标准”氨基酸,在蛋白质中,某些氨基酸残基还可以被改變原子的排序而发生化学结构的变化,从而对蛋白质进行激活或调控。多个蛋白质可以一起,往往是通过结合在一起形成稳定的蛋白质复合物,发挥某一特定功能。 与其他生物大分子(如多糖和核酸)一样,蛋白质是地球上生物体中的必要组成成分,参与了细胞生命活动的每一个进程。酶是最常见的一类蛋白质,它们催化生物化学反应,尤其对于生物体的代谢至关重要。除了酶之外,还有许多结构性或机械性蛋白质,如肌肉中的肌动蛋白和肌球蛋白,以及细胞骨架中的微管蛋白(参与形成细胞内的支撑网络以维持细胞外形)。另外一些蛋白质则参与细胞信号传导、免疫反应、细胞黏附和细胞周期调控等。同时,蛋白质也是动物饮食中必需的营养物质,这是因为动物自身无法合成所有氨基酸,动物需要和必须从食物中获取必需氨基酸。通过消化过程将蛋白质降解为自由氨基酸,动物就可以将它们用于自身的代谢。.

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