DAPI和熒光顯微鏡

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DAPI和熒光顯微鏡之间的区别

DAPI vs. 熒光顯微鏡

DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料，常用於螢光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細胞膜，它可以用于活細胞和固定細胞的染色。 DAPI的發射光為藍色，且DAPI和綠色螢光蛋白（Green fluorescent protein, GFP）或Texas Red染劑（紅色螢光染劑）的發射波長，僅有少部分重疊，研究員可以善用這項特性在單一的樣品上進行多重螢光染色。 ，使用過程中應注意操作與拋棄的處理程序。. 荧光顯微鏡是一種使用荧光或磷光物質的光學顯微鏡，或除此之外使用反射和吸收用於研究的有機或無機物質的特性。“熒光顯微鏡”是指使用熒光來產生一個圖像的任何顯微鏡，無論是更簡單的設置像落射熒光顯微鏡，或更複雜的設計如共聚焦顯微鏡，其使用，以獲得更好的分辨率的熒光圖像。 2014年10月8日，諾貝爾化學獎頒給了艾力克·貝齊格 (Eric Betzig)，W·E·莫尔纳尔 (William Moerner)和斯特凡·W·赫尔 (Stefan Hell)，獎勵其發展超分辨熒光顯微鏡 (Super-Resolved Fluorescence Microscopy)，帶领光學顯微鏡由微米µm(1米的10的負6次方，百萬分之一米)進入納米nm(1米的10的負9次方，十億分之一米)級尺度中。.

绿色荧光蛋白

綠色螢光蛋白(Green fluorescent protein，簡稱GFP)，是一个由约238个氨基酸组成的蛋白質，從藍光到紫外线都能使其激發，發出綠色螢光。虽然许多其他海洋生物也有类似的绿色荧光蛋白，但傳統上，绿色荧光蛋白（GFP）指首先从維多利亞多管發光水母中分离的蛋白质。這種蛋白質最早是由下村脩等人在1962年在維多利亞多管發光水母中發現。這個發光的過程中還需要冷光蛋白質水母素的幫助，且這個冷光蛋白質與鈣離子(Ca2+)可產生交互作用。 在維多利亞多管發光水母中發現的野生型綠色螢光蛋白，395nm和475nm分別是最大和次大的激发波长，它的发射波長的峰點是在509nm，在可見光譜中處於綠光偏藍的位置。绿色荧光蛋白的荧光（QY）为0.79。而從(sea pansy)所得的綠色螢光蛋白，僅在498nm有一個較高的激發峰點。 在細胞生物學與分子生物學中，綠色螢光蛋白(GFP)基因常用做報導基因(reporter gene)。，綠色螢光蛋白基因也可以轉殖到脊椎動物(例如:兔子)上進行表現，並拿來映證某種假設的實驗方法。通過基因工程，綠色螢光蛋白(GFP)基因能穩轉進不同物種的基因組，在後代中持續表達。現在，綠色螢光蛋白(GFP)基因已被导入并表达在许多物種，包括细菌，酵母和其他真菌，鱼（例如斑马鱼），植物，苍蝇，甚至人等的哺乳动物细胞。 2008年10月8日，日本科学家下村脩、美国科学家马丁·查尔菲和钱永健因为发现和改造绿色荧光蛋白而获得了当年的诺贝尔化学奖。.

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细胞

细胞（Cell）是生物体结构和功能的基本单位。它是除了病毒之外所有具有完整生命力的生物的最小单位，也经常被称为生命的积木（病毒仅由DNA/RNA组成，并由蛋白质和脂肪包裹其外）。 in Chapter 21 of fourth edition, edited by Bruce Alberts (2002) published by Garland Science.

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荧光

荧光（fluorescence）是一种光致冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出出射光（通常波长比入射光的的波长长，在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。一般以持續發光時間來分辨荧光或磷光，持續發光時間短於10-8秒的稱為荧光，持續發光時間長於10-8秒的稱為磷光。在日常生活中，人们通常广义地把各种微弱的光亮都称为荧光。.

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顯微鏡

顯微鏡泛指將微小不可見或難見物品之影像放大，而能被肉眼或其他成像儀器觀察之工具。日常用語中之顯微鏡多指光學顯微鏡。放大倍率和清析度（聚焦）為顯微鏡重要因素。 显微镜是在1590年由荷兰的詹森父子所首创。顯微鏡的類型有許多。最常見的（和第一個被發明的）是光學顯微鏡，其使用樣品的光圖像。其他主要的顯微鏡類型是電子顯微鏡（透射電子顯微鏡和掃描電子顯微鏡），超顯微鏡，和各種類型的掃描探針顯微鏡。.

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赫斯特染色

赫斯特染色（英語：Hoechst stains）是螢光染色中的一種類型，專門用來在螢光顯微觀察下標示DNA。由於可將DNA標示，此種染色方式也可以用來辨識內含DNA的細胞核及粒線體的位置。 常用的兩種染劑為Hoechst 33258與Hoechst 33342 ，這兩種染劑可在波長350奈米的紫外光下激化。不過赫斯特染劑是潛在的突變原，處置上需要較為小心。.

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脱氧核糖核酸

--氧核醣核酸（deoxyribonucleic acid，縮寫：DNA）又稱--氧核醣核酸，是一種生物大分子，可組成遺傳指令，引導生物發育與生命機能運作。主要功能是資訊儲存，可比喻為「藍圖」或「配方」。其中包含的指令，是建構細胞內其他的化合物，如蛋白質與核醣核酸所需。帶有蛋白質編碼的DNA片段稱為基因。其他的DNA序列，有些直接以本身構造發揮作用，有些則參與調控遺傳訊息的表現。 DNA是一種長鏈聚合物，組成單位稱為核苷酸，而糖類與磷酸藉由酯鍵相連，組成其長鏈骨架。每個糖單位都與四種鹼基裡的其中一種相接，這些鹼基沿著DNA長鏈所排列而成的序列，可組成遺傳密碼，是蛋白質氨基酸序列合成的依據。讀取密碼的過程稱為轉錄，是根據DNA序列複製出一段稱為RNA的核酸分子。多數RNA帶有合成蛋白質的訊息，另有一些本身就擁有特殊功能，例如核糖體RNA、小核RNA與小干擾RNA。 在細胞內，DNA能組織成染色體結構，整組染色體則統稱為基因組。染色體在細胞分裂之前會先行複製，此過程稱為DNA複製。對真核生物，如動物、植物及真菌而言，染色體是存放於細胞核內；對於原核生物而言，如細菌，則是存放在細胞質中的拟核裡。染色體上的染色質蛋白，如組織蛋白，能夠將DNA組織並壓縮，以幫助DNA與其他蛋白質進行交互作用，進而調節基因的轉錄。.

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